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EFECTO DE LA APLICACIÓN DE ESTRADIOL Y PROGESTERONA SOBRE LA ...

119 Rev Inv Vet Perú 2006; 17 (2): 119-124 1 Práctica privada 2 Laboratorio de Reproducción Animal, FMV-UNMSM. E-mail: [email protected] 3 Estación Experimental ILLPA-INIA ...

Enviado* el 31/12/2010 18:18
119 Rev Inv Vet Perú 2006; 17 (2): 119-124 1 Práctica privada 2 Laboratorio de Reproducción Animal, FMV-UNMSM. E-mail: [email protected] 3 Estación Experimental ILLPA-INIA, Puno EFECTO DE LA APLICACIÓN DE ESTRADIOL Y PROGESTERONA SOBRE LA SUPERVIVENCIA EMBRIONARIA EN LLAMAS Jesús Palomino C.1, Wilfredo Huanca L.2 y Teodosio Huanca M.3 ABSTRACT The effect of exogenous oestradiol and progesterone on embryonic survival around the period of maternal recognition of pregnancy was evaluated in 80 adult llamas with ? 15 days after parturition. An ultrasound evaluation was conducted to detect a preovulatory follicle ( ? 7mm), and then, animals were mated with a male for ? 15 minutes of copulation time. Animals were allocated into 4 groups: G0, placebo; G1, 0.2 mg/llama/day of  estradiol; G2, 15 mg/llama/day of proligestone,  and G3, 0.2 mg/llama/day of estradiol and 15 mg/llama/day of proligestone.  Injection of hormones and placebo was done at days 8 and 9 after copula. Mating day was considered as day 0. Ultrasound evaluations were done on day 2 to determine ovulation, on day 9 to measure the size of the corpus luteum, and on days 20, 25, 30 and 35 to observe the presence of the embryonic vesicle and the embryo. Sexual behaviour was evaluated to verify female receptivity on day 0 and to diagnose early pregnancy on day 15. Embryonic survival was higher in G1 (75%) as compared to other groups: G0 (57.9%), G2 (52.6%), and G3 (55.0%) until day 35, but without significant differences. The size of corpus luteum on day 9 was larger in pregnant (12.8 mm) than in non pregnant llamas (10.8 mm). In conclusion, the results suggested that the application of estradiol between days 8 and 9 after mating may improve embryonic survival rate in llamas. Key words : oestradiol, progesterone, embryonic survival, maternal recognition of pregnancy, llama RESUMEN El efecto de la aplicación de estradiol y progesterona, alrededor del momento de reconocimiento maternal de la preñez, sobre la supervivencia embrionaria, fue evaluada en 80 llamas adultas con descanso post parto ? 15 días. Se les hizo una ecografía para determinar la presencia del folículo preovulatorio ( ? 7 mm) y luego fueron sometidas a monta por un tiempo de cópula ? 15 minutos. Las llamas fueron distribuidas en 4 grupos: G0, placebo; G1, 0.2 mg/llama/día de estradiol; G2, 15 mg/llama/día de proligestona;  y G3, 0.2 mg/llama/día de estradiol y 15 mg/llama/día de proligestona.  La administración de los compuestos se hizo el día 8 y 9 post cópula. El día de la monta fue el día 0. Se hicieron evaluaciones ecográficas el día 2 para determinar ovulación, el día 9 para medir cuerpo lúteo y los días 20, 25, 30 y 35 para observar vesícula embrionaria y presencia del embrión. La conducta sexual fue evaluada para determinar receptividad frente al macho el día 0 y
Rev Inv Vet Perú 120 J. Palomino et al. para diagnosticar gestación temprana el día 15. El porcentaje de supervivencia embrionaria entre los días 20 y 35 fue mayor en el G1 (75%), en comparación con los otros grupos: G0 (57.9%), G2 (52.6%) y G3 (55.0%), aunque sin encontrar diferencia estadística entre gru- pos. Por otro lado, el tamaño del cuerpo lúteo al día 9 post cópula tuvo un diámetro mayor en llamas preñadas (12.8 mm) que en no preñadas (10.8 mm) al día 35. En conclusión, estos resultados indicaron que con la aplicación de estradiol entre los días 8 y 9 post cópula se presentaría una mejor respuesta sobre el porcentaje de supervivencia embrionaria en la llama. Palabras clave: estradiol, progesterona, supervivencia embrionaria, reconocimiento maternal de la preñez, llama INTRODUCCIÓN Los niveles de progesterona en llamas son basales al momento de la monta, incrementan en el día 4 a 0.9 nmol/l y en el día 8 alcanzan 12.1 nmol/l, para comenzar a declinar si no hay concepción o mantenerse en alto durante toda la gestación (Aba et al ., 1995). Las llamas preñadas muestran un des- censo momentáneo en los niveles séricos de progesterona entre los días 8 y 10 (Adams et al ., 1991), probablemente debido al inicio de la regresión luteal inducida por el útero, pero rescatada por el embrión presente y en desa- rrollo (Adams et al ., 1991; Aba et al ., 1995); lo cual estaría relacionado con la elevación de niveles de estradiol 17? los días 11-13 y de un ligero incremento de concentraciones de PGF 2? al día 9 de gestación (Aba et al ., 1995). La luteólisis ocurre en llamas no preñadas      entre los días 9-11 post monta, observándose        un aumento de los niveles séricos de la PGF 2? , que coincide con el periodo de regresión del cuerpo lúteo (Adams et al ., 1991). Se estima que entre los días 8 y 15 post monta se produce el reconocimiento maternal    de la preñez (RMP) en las llamas, donde el embrión sería el responsable de dar la señal    para evitar la luteólisis (Aba et al ., 1995). En el dromedario se han hecho estudios que indican que el estradiol podría jugar un rol importante en el RMP (Skidmore et al ., 1997). El mecanismo del RMP en camélidos no está establecido; sin embargo, se cree que éste sea producido de una manera similar como ocurre en las cerdas, donde el estradiol 17 ? secuestra a la PGF 2? del útero y hace que sea liberada a la luz uterina impidiendo su paso a la circulación y su llegada al ovario para producir luteólisis (Bazer et al ., 1986). En camélidos sudamericanos se ha de- mostrado que hay una pérdida embrionaria de 50% a los 30 días de gestación (Fernández- Baca et al ., 1970). Se ha reportado en alpacas que la aplicación de GnRH al día 4 post ovulación incrementa la supervivencia embrionaria (Araínga, 2002), y que aplican- do estradiol 17 ? y progesterona a los 8 y 9 días post ovulación se obtiene un efecto benéfico,        llegándose a un 80% de superviven- cia embrionaria (Chipayo, 2002). Estos re- portes sugieren que a través del manejo hormonal      se puede mejorar la supervivencia embrionaria; por lo tanto, el objetivo de este estudio fue determinar el efecto de la aplicación     de estradiol y progesterona a los días 8 y 9 post cópula, sobre la tasa de supervivencia embrionaria en llamas. MATERIALES Y MÉTODOS Lugar de estudio El experimento fue realizado entre los meses de enero y marzo del 2003 en el anexo Quimsachata, perteneciente a la Estación Experimental ILLPA del Instituto Nacional de Investigación Agraria (INIA). La Esta-
121 Rev Inv Vet Perú Efecto de la aplicación de estradiol y progesterona sobre la supervivencia embrionaria en llamas ción está ubicada a 4,200 msnm, entre los distritos de Santa Lucía y Cabanillas de las provincias de Lampa y San Román, respecti- vamente, en el departamento de Puno. Animales Se utilizaron 80 llamas adultas con his- torial reproductivo de haber tenido al menos un parto anterior y con descanso postparto ?15 días. Las hembras seleccionadas fueron evaluadas mediante ultrasonografía,  utilizan- do un ecógrafo portátil ALOKA SSD 500 equipado con un transductor lineal de 7.5 MHz de frecuencia, para determinar la pre- sencia de un folículo ?7 mm y ser servidas por el sistema de empadre controlado. Todos los animales seleccionados recibieron las mis- mas condiciones de manejo y fueron alimen- tados con pastos naturales. Diseño experimental Luego de las montas, los animales fue- ron asignados al azar en uno de los cuatro grupos, recibiendo inyecciones vía im los días 8 y 9 post cópula según el siguiente esquema: G0 (n=20):2 ml/animal/día de suero fisioló- gico. G1 (n=20):0.2 mg/animal/día de benzoato de estradiol. G2 (n=20):15 mg/animal/día de proliges- tona. G3 (n=20):0.2 y 15mg/animal/día de ben- zoato de estradiol y proligestona, respectivamente. Procedimiento experimental El día de la monta fue el día 0. Se reali- zaron ecografías en el día 2 para determinar ovulación por desaparición del folículo domi- nante, en el día 9 para determinar presencia y tamaño del cuerpo lúteo, y en los días 20, 25, 30 y 35 para observar vesícula embrionaria y presencia del embrión. Se realizó una prueba de receptividad sexual el día 15. Las hembras no receptivas al macho fueron consideradas preñadas, mien- tras que las que adoptaban la posición de cópula     fueron consideradas vacías. Análisis estadístico Se utilizó el paquete estadístico STATA 8.0 (Statistic Data Analisis). La superviven- cia embrionaria por grupos fue analizada mediante curvas de supervivencia utilizando la prueba estadística de Kaplan Meier. La tasa de supervivencia embrionaria al día 35 fue analizada con la prueba de Log-Rank. El porcentaje de ovulación y el tamaño del cuerpo lúteo de los diferentes grupos al día 9 postcópula       fue analizado por la prueba de análisis de varianza (ANOVA) de una sola vía. RESULTADOS Tasa de ovulación En el 97.5% de las llamas ocurrió la ovulación, verificada por ecografía al día 2 postcópula (Cuadro 1). El promedio de tamaño     del folículo dominante al momento del servicio fue similar para todos los grupos, sien- do el menor tamaño individual ?7 mm. El 100% de los animales presentó receptividad frente al macho. Tasa de supervivencia embrionaria (TSE) La TSE obtenida al día 15 por prueba de receptividad sexual fue ligeramente superior     en G2 (84.2%) en comparación con los demás grupos. Sin embargo, al día 20 y 35 fue mayor en G1 (75%) aunque no hubo dife- rencias significativas entre grupos (Cuadro 2). Tamaño del cuerpo lúteo (día 9) y su relación       con la TSE No hubo diferencias significativas entre    grupos con relación al tamaño del cuerpo lúteo al día 9 post cópula; sin embargo, se encontró un mayor tamaño del cuerpo lúteo en los animales que presentaron mayor su- pervivencia embrionaria en comparación con los que tuvieron mortalidad embrionaria (Cua- dro 3).
Rev Inv Vet Perú 122 J. Palomino et al. DISCUSIÓN El presente estudio reporta el efecto de la aplicación de estradiol y progesterona los días 8 y 9 post cópula, que se sugiere como el momento de inicio del RMP en camélidos sudamericanos (Aba et al., 1995); así como la posibilidad de que el estradiol desempeñe un rol importante en este proceso basado en la presencia de folículos estrogénicos (?7 mm) hallados por Araínga (2002) alrede- dor de los días 10-12 post-ovulación. Cuadro 3. Tamaño del cuerpo lúteo (mm) al día 9 post cópula en llamas en relación con la supervivencia (SE) y la mortalidad embrionaria (ME) al día 35 post cópula Grupos G0 G1 G2 G3 Total SE 12.9±1.9 (11)1 13.3±2.3 (15) 11.8±1.8 (10) 12.8±2.1 (11) 12.8±2.1 (47) ME 11.4±2.2 (8) 11.4±2.7 (5) 10.3±1.6 (9) 10.3±2.6 (9) 10.8±2.2 (31) G0: Testigo; G1: 0.2 mg estradiol; G2: 15 mg proligestona; G3: 0.2 mg estradiol y 15 mg proligestona. Las hormonas se aplicaron los días 8 y 9 post cópula       1 Número de animales Cuadro 1. Tasa de ovulación en llamas sometidas a monta controlada Ovulación G0 n=20 G1 n=20 G2 n=20 G3 n=20 Total n=80 19 20 19 20 78 % 95 100 95 100 97.5 G0: Testigo; G1: 02 mg estradiol; G2: 15 mg proligestona; G3: 0.2 mg estradiol y 15 mg proligestona. Las hormonas se aplicaron los días 8 y 9 post cópula Cuadro 2.  Porcentaje de supervivencia embrionaria 1 en llamas sometidas a monta controlada G0: Testigo; G1: 02 mg estradiol; G2: 15 mg proligestona; G3: 0.2 mg estradiol y 15 mg proligestona. Las hormonas se aplicaron los días 8 y 9 post cópula     1 Verificado por ultrasonografía   2  Realizado por prueba de receptividad sexual Día de evaluación post cópula G0 n=19 G1 n=20 G2 n=19 G3 n=20 Total n=78 152 79.0 75.0 84.2 80.0 79.5 20 57.9 75.0 63.2 55.0 62.8 25 57.9 75.0 52.6 55.0 60.3 30 57.9 75.0 52.6 55.0 60.3 35 57.9 75.0 52.6 55.0 60.3
123 Rev Inv Vet Perú Efecto de la aplicación de estradiol y progesterona sobre la supervivencia embrionaria en llamas Los resultados sobre la frecuencia de supervivencia embrionaria demuestran una tendencia hacia un mejor efecto por parte del grupo de estradiol (G1); coincidiendo con los resultados de Chipayo et al. (2003) en alpacas. El G2 de proligestona no presentó dife- rencias con el grupo control, lo cual podría ser explicado por el efecto progestagénico leve de la proligestona sobre el tejido endometrial (Van Os, 1982). Este resultado contrasta con lo reportado por Chipayo et al. (2003), quienes tuvieron respuesta a la administración           de progesterona a los días 8 y 9 post ovulación en alpacas. La combinación de estradiol + proliges- tona (G3) fue estudiada en ovejas para sincronizar ondas foliculares (Raw et al. , 1995) donde se obtuvo un incremento en la liberación de PGF 2? , que produciría la regresión     del cuerpo lúteo y posteriormente la mortalidad embrionaria. Sin embargo, en el presente estudio no se encontraron diferen- cias con el grupo control. Dos de las 80 hembras no ovularon fren- te al estímulo coital. Existe información que indica que puede existir hasta 10% de fallas ovulatorias, posiblemente por las variaciones en el estadio de desarrollo folicular en el que podrían haber estado las hembras durante el periodo de monta (Novoa, 1992). No hubo diferencia significativa entre grupos en tamaño del cuerpo lúteo al día 9 post cópula. Sin embargo, se encontró en llamas    preñadas una tendencia a presentar CLs ligeramente mayores que en las vacías, al igual que en otros reportes (Adams et al ., 1991). CONCLUSIONES Se encontraron evidencias no conclu- sivas que la aplicación de estradiol exógeno a los 8 y 9 días post-cópula en llamas permite tener una mayor super- vivencia embrionaria al día 35 de la có- pula. El tamaño del cuerpo lúteo al día 9 post cópula en llamas preñadas es ligeramente mayor que el de llamas no preñadas. LITERATURA CITADA 1. Aba, M.; M. Forsberg; H. Kindahl; J. Sumar; L. Edqvist. 1995. Endocrine changes after mating in pregnant and non-pregnant llamas and alpacas. Acta Vet. Scand. 36: 489-498. 2. Adams, G; J. Sumar; O. Ginther. 1991 . Form and function of the corpus luteum in llamas. Anim. Reprod. Sci. 24: 127-138. 3. Araínga, M.; V. Leyva; W. García. 2003. Efecto de la GnRH en el proceso de reconocimiento maternal de la preñez    sobre la supervivencia embrionaria en alpacas. Rev. Inv. Vet., Perú 14: 104- 110. 4. Bazer, F.; J. Vallet; R. Roberts; D. Sharp; W. Thatcher. 1986. Role of conceptus secretory products in establishment          of pregnancy. J. Reprod. Fertil. 76: 841-850. 5. Chipayo, Y.; V. Leyva; W. García. 2003. Efecto del estradiol en el periodo de reconocimiento maternal de la preñez sobre la supervivencia embrionaria en alpacas. Rev. Inv. Vet., Perú 14: 111-118. 6.Fernández Baca, S.; W. Hansel; C. Novoa. 1970. Embryonic mortality in the alpaca. Biol. Reprod. 3: 243-251. 7. Novoa, C. 1992 . Reproducción en camélidos. Rev. Cien. Vet., Perú 8: 9-11. 8. Raw, R.; W. Silvia; T. Curry. 1995. Effects of progesterone and estradiol on prostaglandin endoperoxide synthase in ovine endometrial tissue. Anim. Reprod. Sci. 40: 17-30.
Rev Inv Vet Perú 124 J. Palomino et al. 9. Skidmore, J.; W. Allen; R. Heap. 1997 . Maternal recognition of pregnancy in the dromedary camel. J. Camel Pract. Res. 4: 187-192. 10. Van Os, J. 1982. Oestrus control in the bitch with proligestone. A clinical study. PhD Thesis. University of Utrecht. Netherlands. 56 p.

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