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Desarrollo y validación de una técnica analítica por ...

universidad nacional mayor de san marcos facultad de farmacia y bioquimica departamento acadÉmico de farmacotecnia y administraciÓn farmacÉutica desarrollo y validación de una ...

Enviado* el 31/12/2010 18:10
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE FARMACOTECNIA Y ADMINISTRACIÓN FARMACÉUTICA Desarrollo y validación de una técnica analítica por cromatografía líquida de alta performance (HPLC) para cuantificar clonixinato de lisina 125 mg y pargeverina clorhidrato 10 mg en tabletas recubiertas TESIS para optar al título profesional de Químico Farmacéutica AUTORES Yulissa Paola Azaña Sulca Jeanette Roxana Cornelio Bello ASESOR Alfredo Castillo Calle Lima-Perú 2007
3 DEDICATORIA A mis padres Julio y Consuelo por su amor incondicional, a mis hermanos: Juana, Iris, Julio y Percy por sus  sabios consejos,  y en especial a mi hijo Mathyas Rodrigo por ser el motivo y la felicidad de mi existencia.           Yulissa A mi madre Sabina Bello por su amor, confianza e  incansable esfuerzo por darnos lo mejor. A mis hermanos José y Danitza por su incondicional apoyo  y consejos. A Melania por llenar de energía y alegría nuestras vidas.         Jeanette
2 AGRADECIMIENTOS Agradecemos a la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos por la formación profesional recibida. A los profesores de la Facultad, quienes nos impartieron conocimientos que son el soporte de nuestro desarrollo profesional. Al Laboratorio FARPASAC S. A. por permitirnos desarrollar nuestro trabajo en sus instalaciones y en especial a la Dra. Natalí Valdez, a la Dra. Amy Betetta y a la Dra. Rocío Farfán por su apoyo y conocimientos brindados. A nuestro asesor y maestro Mg. Alfredo Castillo por su apoyo incondicional, por ser nuestra guía y modelo profesional a seguir. A nuestras amigas Lucila Millones, Maria Luisa Fort y Claudia Arcos por sus consejos y por mantener nuestra amistad cada día más fortalecida. A nuestros padres y hermanos por su confianza y esfuerzo infatigable por lograrnos profesionales. A todas las personas que hicieron posible realizar el presente trabajo.
4 ÍNDICE GENERAL Pág. I. INTRODUCCIÓN 6 II. OBJET I V OS 9 Objetivo General Objetivos Específicos III. ANTECEDENTES Y PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 10 IV. HIPOTESIS 13 V. METODOLOGIA        13 VI. DISEÑO EXPERIMENTAL      13 VII. GENERALIDADES Asociación Clonixinato de Lisina y Pargeverina Clorhidrato   14 7.1.1.  Clonixinato de Lisina      15     7.1.1.1. Propiedades físicas y químicas      15     7.1.1.2. Propiedades farmacológicas      16      7.1.2. Pargeverina Clorhidrato      16 7.1.2.1. Propiedades físicas y químicas      16 7.1.2.2. Propiedades farmacológicas      17 Cromatografía Líquida de Alta Performance HPLC       17      7.2.1.  Concepto      17 7.2.2. Partes 18 7.2.2.1. Fase Estacionaria: Columna      18 7.2.2.2. Bomba 20 7.2.2.3. Inyectores 20 7.2.2.4. Detectores 21
5 7.2.2.5. Sistemas de toma y procesamiento de datos       22     7.2.3. Aptitud del sistema      22     7.2.4. Interpretación de cromatogramas      23     7.2.5. Establecimiento del método en  cromatografía de líquidos      24 7.2.5.1.  Selección de la columna      25 7.2.5.2. Selección de la fase móvil      26 7.3. Calificación del Sistema      28 7.3.1. Calificación del HPLC      29 7.3.1.1. Calificación de Instalación      29 7.3.1.2. Calificación Operacional      30 7.3.1.3. Calificación de Performance      30 7.3.2. Calibración del Instrumental      31 7.3.3. Verificación de equipos      31 7.4. Método Analítico 31 7.4.1. Concepto 31 7.4.2. Fases en el desarrollo de un método analítico      31 7.5. Validación de métodos analíticos      32 7.5.1. Concepto 33     7.5.2. Tipos 7.5.2.1. Validación Prospectiva      33 7.5.2.2. Validación Retrospectiva      33 7.5.2.3. Revalidación 34       7.5.3. Etapas 35      7.5.4. Características analíticas      35 7.5.4.1.   Exactitud      35
6 7.5.4.2.   Precisión      36 7.5.4.3.   Especificidad      37 7.5.4.4. Sensibilidad, Limite de detección, Limite de cuantificación        40 7.5.4.5. Linealidad e Intervalo      43 7.5.4.6. Robustez 45       7.5.4.7. Tolerancia .           45 7.5.5. Criterios de Validación a estudiar en función del tipo de método analítico 46 7.6.  Calidad en la Industria farmacéutica      47      7.6.1.  Calidad      47      7.6.2.  Control de Calidad      48      7.6.3.  Aseguramiento de la calidad      48      7.6.4.  Gestión de la Calidad      49      7.6.5.  Sistema de Garantía de Calidad      50      7.6.6.  Normativa Internacional      51      7.6.7.  Buenas Prácticas de Manufactura      52      7.6.8.  Buenas Prácticas de Laboratorio      52 VIII. PARTE EXPERIMENTAL 53 IX. RESULTADOS 93 X. DISCUSIONES 95 XI. CONCLUSION 100 XII. ANEXOS 101 XIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 112
7 RESUMEN Se desarrolló una técnica analítica por cromatografía liquida de alta performance (HPLC) para cuantificar los principios activos clonixinato de lisina y pargeverina clorhidrato en tabletas recubiertas, debido a que la técnica de análisis para este medicamento compuesto no se encuentra en libros oficiales. La técnica de análisis para ambos principios activos es realizada en un solo sistema (fase móvil, columna cromatográfica, longitud de onda), diferenciándose sólo en la preparación de la muestra y el volumen de inyección por lo que no pueden ser cuantificadas en un solo cromatograma, debido a la gran diferencia de sus concentraciones en la tableta y sus propiedades de solubilidad. Previamente a la validación se evaluó la aptitud del sistema. Los resultados fueron conformes a las especificaciones para un método cromatográfico recomendadas por la  USP 30, comprobando que el equipo, el sistema electrónico, las operaciones analíticas y las muestras a analizar constituyen un sistema integral que puede evaluarse como tal. Para la validación se evaluaron los parámetros de desempeño de la técnica como son: Selectividad, Exactitud, Precisión, Precisión Intermedia, Linealidad y Rango. Los resultados de estos parámetros se sometieron a pruebas estadísticas demostrando que la técnica analítica propuesta para la cuantificación de los principios activos es selectiva, exacta, precisa y lineal, así mismo la confiabilidad de la nueva técnica, garantizando de esta forma la calidad, eficacia e inocuidad del medicamento. Palabras claves: Clonixinato de lisina, pargeverina clorhidrato, cromatografía liquida de alta performance, validación, técnica analítica
8 SUMARY An analytical technique by high performance liquid chromatography (HPLC) was developed to quantify the active principles lysine clonixinate and pargeverine chlorhidrate in covered tablets, because the technique of analysis for this compound medicine is not in official books. The technique of analysis for both active principles is made in a single system (movable phase, chromatographic column, wavelength), being different itself only in the sample preparation and the volume of injection reason why cannot be quantified in a single chromatogram, due to the great difference of their concentrations in the tablet and its properties of solubility. Previously to the validation the aptitude of the system was evaluated. The results were in agreement to the specifications for a chromatographic method recommended by the USP 30, verifying that the equipment, the electronic system, the analytical operations and the samples to analyze constitute an integral system that can be evaluated like so. For the validation the parameters of performance of the technical were evaluated as they are: Selectivity, Accuracy, Precision, Intermediate Precision, Linearity and Range. The results of these parameters were also put to the test statistical demonstrating that the proposed analytical technical for the quantification of the active principles is selective, exact, precise and linear, to the trustworthiness of the new technical, guaranteeing of this form the quality, effectiveness and harmlessness of the medicine. Key words: Lysine clonixinate, pargeverine chlorhidrate, high performance liquid chromatography, validation, analytical technique
9 I. INTRODUCCION En el mercado farmacéutico actual existen varios medicamentos de gran demanda por la población, cuyas técnicas de análisis no se encuentran publicadas en las obras oficiales que generalmente se consultan, a saber: Farmacopea americana, británica, europea y japonesa. Esto hace necesario desarrollar nuevas técnicas de análisis en el laboratorio con el fin de separar y cuantificar los principios activos de dichos medicamentos. Por lo tanto, el desarrollo y validación de técnicas analíticas para medicamentos es una tarea que se viene realizando en diferentes laboratorios farmacéuticos peruanos en los últimos años, debido a las exigencias de calidad y a la  mejora de la productividad. Los procedimientos para la evaluación de los niveles de calidad de los medicamentos en el país están dados por la Dirección General de Insumos, Medicamentos y Drogas (DIGEMID) a través del Manual de Buenas Prácticas de Manufactura de Productos Farmacéuticos, como instrumento normativo necesario para cautelar la calidad en la fabricación de los productos farmacéuticos. Este organismo gubernamental se rige, a su vez, de reglamentaciones dadas por organismos internacionales reconocidos oficialmente como Food and Drug Administration (FDA), Organización Mundial de la Salud (OMS), Asociation of Official Analytical Chemists (AOAC), Conferencia Internacional Tripartita Sobre Armonización (ICH), Farmacopeas Europeas y Americana.
10 En el presente trabajo se ha desarrollado una técnica de análisis para cuantificar clonixinato de lisina 125 mg y pargeverina clorhidrato 10 mg en tabletas recubiertas por Cromatografía liquida de alta performance (HPLC). Las razones de la preferencia de esta técnica son su sensibilidad, su fácil adaptación a las determinaciones cuantitativas exactas, su idoneidad para la separación de especies no volátiles o termolábiles y, sobre todo, su gran aplicabilidad a sustancias que son de primordial interés en la industria y en muchos campos de la ciencia. Así mismo, para el desarrollo de la técnica fue necesario conocer las propiedades fisicoquímicas de los principios activos: peso molecular, estructura química, valores de pK (constante de solubilidad), solubilidad, etc., y/o las propiedades de la formulación. Finalmente, la técnica fue validada según lo recomendado en la USP 30, realizando una aptitud del sistema y evaluando el método con los parámetros de desempeño en cuanto a selectividad, exactitud, precisión, precisión intermedia, linealidad y rango. El desarrollo y validación de la presente técnica analítica fue realizada en el laboratorio FARPASAC en el Departamento de Control de Calidad durante los meses de Mayo a Julio del 2007.
11 Este trabajo aportará conocimientos técnico-científicos que pueden ser aplicados en la actividad de las áreas de control de calidad e investigación de los laboratorios farmacéuticos del país.
12 II. OBJETIVOS 2.1. Objetivo General: - Desarrollar y validar prospectivamente una nueva técnica analítica por Cromatografía Líquida de Alta Performance (HPLC) para cuantificar clonixinato de lisina 125mg. y pargeverina clorhidrato 10mg. en tabletas recubiertas. 2.2.  Objetivos Específicos. - Desarrollar una técnica de análisis capaz de cuantificar los principios activos del medicamento. - Demostrar mediante la validación la confiabilidad del nuevo método. - Lograr la conformidad del medicamento respecto a las especificaciones garantizando su calidad, eficacia e inocuidad. - Cumplir con las normas de la Dirección General de Medicamentos y Drogas (DIGEMID): Buenas Prácticas de Manufactura  y Buenas Práctica de Laboratorio, con respecto a los medicamentos para ser comercializados.
13 III. ANTECEDENTES Y PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA El nuevo producto desarrollado en el laboratorio Farmacéutica del Pacífico S.A.C. (FARPASAC) es un medicamento que asocia dos principios activos: clonixinato de lisina y pargeverina clorhidrato. Dicho medicamento ya se expende en el mercado farmacéutico del país como un  medicamento espasmolítico y analgésico destinado a la terapéutica patogénica y sintomática de los síndromes espasmódicos de origen gastrointestinal, hepatobiliar, urinario o genital, cualquiera sea su grado de intensidad y evolución (1). Sin embargo, la técnica de análisis no se encuentra publicada en las obras oficiales a las que generalmente se consulta, a saber: Farmacopea Americana y Británica. Esto hace necesario desarrollar una nueva técnica de análisis en el laboratorio para separar y cuantificar dichos principios activos. Para desarrollar una técnica analítica de cuantificación es necesario, en primer lugar, establecer el método analítico más conveniente a ser utilizado. Para esto se debe conocer la naturaleza fisicoquímica de los principios activos: peso molecular, estructura química, valores de pK (constante de solubilidad), solubilidad, etc. y/o las propiedades de la formulación. La Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) es una técnica de separación y cuantificación de compuestos químicos. La mayoría de las drogas, sean compuestos no volátiles o térmicamente inestables pueden analizarse mediante esta técnica sin riesgo de descomposición. Sólo los
14 compuestos que tienen diferentes factores de capacidad pueden ser separados por HPLC (2). Las razones de la preferencia de esta técnica son su sensibilidad, su fácil adaptación a las determinaciones cuantitativas exactas, su idoneidad para la separación de especies no volátiles o termolábiles y, sobre todo, su gran aplicabilidad a sustancias que son de primordial interés en la industria, en muchos campos de la ciencia. Algunos ejemplos de estos materiales incluyen los aminoácidos, proteínas, ácidos nucleicos, carbohidratos, terpenoides, plaguicidas, antibióticos, esteroides, especies órganometálicas y una cierta variedad de sustancias inorgánicas (3). Por lo tanto,  los componentes activos del medicamento, por sus características,  pueden ser identificados y cuantificados mediante la técnica de HPLC. Por ser una técnica desarrollada internamente en el laboratorio FARPASAC, debe ser validada de acuerdo a los requerimientos establecidos en la USP 30 (Farmacopea Americana) y la International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use (ICH). Con este procedimiento se probará la confiabilidad de la técnica analítica para asegurar la calidad, eficacia e inocuidad del medicamento. Por tanto, la validación de la técnica analítica constituye un instrumento importante a este respecto.
15 El desarrollo y validación de técnicas analíticas para materias primas y/o productos terminados es una tarea que se viene realizando en diferentes laboratorios farmacéuticos peruanos en los últimos años, debido a las exigencias de calidad y a la  mejora de la productividad. Como una muestra de ello se tiene las siguientes tesis realizadas: ? Validación del Método de Valoración de Loratadina en tabletas por Cromatografía Líquida de Alta Presión y Estudio Comparativo In Vitro de las diferentes marcas del producto comercializados en el país, 1999. ? Validación del Método Analítico de Valoración del Dobesilato de Calcio 500mg capsula por Espectrofotometría de Absorción UV Visible, 2001. ? Desarrollo y Validación Prospectiva de una técnica analítica por Cromatografía Líquida de Alta Performance (HPLC) para el Enalapril 10 mg. tabletas cubiertas, 2004. ? Validación del Método de Valoración de Glimperide presentación comprimidos de 4 mg. por el Método de Cromatografía Líquida de Alta Performance HPLC, 2004. Los procedimientos para la evaluación de los niveles de calidad de los medicamentos en el país están dados por la Dirección General de Insumos, Drogas y Medicamentos (DIGEMID) a través del Manual de Buenas Prácticas de Manufactura de Productos Farmacéuticos, como instrumento normativo necesario para cautelar la calidad en la fabricación de los productos farmacéuticos (4). Este organismo gubernamental a su vez se rige de reglamentaciones dadas por organismos internacionales reconocidos oficialmente como Food and Drug Administration (FDA),
16 Organización Mundial de la Salud (OMS), Asociation of Official Analytical Chemists (AOAC), Conferencia Internacional Tripartita Sobre Armonización (ICH), Farmacopeas Europeas y Americana. IV. HIPOTESIS La nueva técnica analítica desarrollada para la cuantificación de clonixinato de lisina 125 mg y pargeverina clorhidrato 10 mg tabletas recubiertas por cromatografía líquida de alta Performance, cumple con los parámetros de desempeño de la validación. V. METODOLOGIA Metodología experimental, validación prospectiva categoria I. VI. DISEÑO EXPERIMENTAL Pasos o etapas del estudio: a. Calibración y calificación de los equipos e instrumentos. b. Calificación del HPLC. i. Calificación de instalación ii. Calificación operacional iii. Calificación de performance c. Desarrollo de la técnica analítica cuantitativa para clonixinato de lisina y clorhidrato de pargeverina en tabletas. d. Ensayo de aptitud del sistema cromatográfico. e. Validación de la técnica analítica: i. Selectividad ii. Exactitud
17 iii. Precisión o repetibilidad iv. Precisión intermedia v. Linealidad. vi. Rango f. Evaluación estadística de los resultados. g. Discusiones. h. Conclusión. VII. GENERALIDADES 7.1.  Asociación Clonixinato de Lisina y Pargeverina Clorhidrato. Es la asociación de dos principios activos en una forma farmacéutica que disminuye el tono y la motilidad del músculo liso de las vísceras huecas, poseyendo un leve efecto neurotrópico potenciador que por su escasa magnitud no presenta efectos atrop

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